熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素,作為Luciferase的作用底物,常用于以下實驗:
1. 報告基因分析
2. In vivo imaging (動物活體成像)
3. In vitro imaging (細胞體外分析)
4. ATP測定
5. 其它luciferase及其基因相關的分析和研究工作
2、熒光素鉀鹽應用于活體成像的基本原理
細胞中D-熒光素酶參與的化學發光反應遵守酶促反應的基本原理,在底物D-熒光素鉀過量的情況下,反應產生的光子數(發光量)與細胞中的D-熒光素酶的量成正相關,從而可以推算出細胞的數量。
3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩定性
D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液,溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。
溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5(發生水解作用)或>7.5(發生消旋化作用,D型轉化為L型)的情況下,D-熒光素鉀鹽相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣,將加速D-熒光素鉀的降解速度。
熒光素鉀鹽配成溶液后,在的保存條件(-80°C,pH,無氧氣)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-熒光素應盡量在1年內使用完。
有水存在的情況下,主要發生消旋化作用,即D-熒光素轉化成L-熒光素,有報道稱L-熒光素對熒光素酶催化的酶促反應有抑制作用。
4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區別
主要區別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高,且溶解速度較快,故在一般的生物學試驗中常用D-熒光素鉀鹽。
5、熒光素鉀鹽的保存和運輸條件
保存條件:≤-20°C,避光,保持干燥。(在不打開包裝的條件下,可保存兩年時間)。
運輸條件:高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時間內常溫條件下保存,運輸條件為常溫。
原裝(沒有打開包裝)熒光素的包裝瓶中充有氬氣,保證其穩定性,打開包裝后,請嚴格按照保存條件保存。
D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性,其暴露于空氣中,易吸潮。在稱量過程中,請考慮其易吸潮的特性,先進行溫度平衡,再快速稱取